重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD的构建及其表达

• 作者: 孔维佳 彭炜 李隽 杨阳 胡钰娟 郝亚楠 钟毅
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 锰超氧化物歧化酶 腺相关病毒2型 转染 边缘细胞 耳蜗
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 210-215
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4425字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.03.005

摘要

目的 构建含有大鼠源性锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因的重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,检测其在大鼠耳血管纹边缘细胞和耳蜗组织内的表达.方法 将大鼠心肌组织来源的SOD基因克隆入融合表达载体pEGFP-N1中,再以限制性酶切方法克隆入真核表达载体pSNAV2.0-IRES-EGFP中,最后将其包装为rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD病毒颗粒,用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、RT-PCR及Western印迹检测MnSOD基因的表达.结果 真核表达载体pEGFP-N1/MnSOD和pSNAV2.0-IRES-EGFP/MnSOD经酶切、PCR和测序鉴定均检测到MnSOD基因的完整序列,被rAAV2-EGFP/MnSOD感染的耳边缘细胞和内耳组织中MnSOD蛋白的表达均高于空白对照耳.结论 成功构建了大鼠源性MnSOD基因的重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,并使其在大鼠耳边缘细胞和大鼠耳蜗组织中成功表达,为抗氧化基因治疗内耳疾病的研究奠定了基础.