油菜黑芥子酶基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 宋达峰 沈莲清 王向阳 肖海燕 顾青
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 油菜 黑芥子酶 克隆 诱导表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 642-646
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.04.016

摘要

通过RT-PCR从浙双758油菜(Brassica napus)种子的总RNA中扩增出黑芥子酶(EC3.2.1.147)MYR J基因,并克隆测序,测序结果在GenBank中的登陆号为EF583560,其翻译的氨基酸序列与黑芥子酶(GenBank中的登陆号为Q00326)仅有一个氨基酸不同,同源性达到99%.克隆载体经Sal I酶解后将MYRI基因片段插入载体pGEX-4T-1中构建成原核表达载体pGEX-4T-1-MYR1,并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中.其重组菌株经IPTG诱导表达,在90 kD处有表达量很高的1条带.用0.02 mmol/L IPTG 20℃诱导2 h,得到可溶的GST-MYR1融合蛋白,用10 mg/mL芥子苷作底物,经过检测其比活力为0.003 1 U/mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王向阳	浙江工商大学食品与生物工程学院	94	793	16.0	23.0
2	沈莲清	浙江工商大学食品与生物工程学院	36	429	13.0	19.0
3	顾青	浙江工商大学食品与生物工程学院	39	297	11.0	15.0
4	宋达峰	浙江工商大学食品与生物工程学院	11	128	7.0	11.0
5	肖海燕	浙江工商大学食品与生物工程学院	1	3	1.0	1.0