syk真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响

• 作者: 单保恩 宋小天 齐义新
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Syk 真核表达 乳腺癌细胞 MHC-Ⅰ
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3-5
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3105字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.01.002

摘要

目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响.方法:以RTPCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中.对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,经G418筛选,构建syk基因稳定表达的细胞株,通过Western blot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的表达.结果:构建了hsyk真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得稳定表达.表达Syk的MDA-MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ.结论:成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达,为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单保恩	河北医科大学第四医院科研中心	390	3712	26.0	43.0
2	宋小天	河北医科大学第四医院科研中心	12	50	4.0	6.0
3	齐义新	河北医科大学第四医院科研中心	24	109	5.0	9.0