人骨形成蛋白7基因重组35型腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 原向伟 康焱 廖威明 张珑涓 袁振华 雷磊
• 来源期刊: 中国骨与关节损伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形成蛋白 腺病毒 基因 治疗
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 655-658
• 页数: 4页
• 分类号: R6
• 字数: 3982字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9935.2008.08.014

摘要

目的 探讨构建携带人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)基因的重组35型腺病毒(serotype 35 adenovirus,Ad5F35)载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达.方法 以peDNA 1.1/Amp-hBMP7质粒为模板扩增骨形成蛋白(BMP-7)基因(1.3 kb),将回收的PCR产物片段克隆入pDC316载体,获得重组质粒pDC316-hBMP7.骨架质粒pBHG-fiberS/35和穿梭质粒pDC316-b.BMP7共转染293细胞,同源重组产生重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7.同样的方法构建rAd5/F35-EGFP.在体外用不同感染复数(M·O·I)值的rAd5/F35-hBMP7和rAd5/F35-GFP分别转染兔MSCs,并留置空白对照.采用流式细胞仪、RT-PCR方法检测目的 基因的转染效率和表达.结果 PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7质粒构建正确.转染兔MSCs的最高效率可达99%,hBMP-7基因存在于转染后的MSCs中并表达相应的mRNA.结论 本实验成功构建了含hBMP-7基因的重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7载体,在体外能高效转染兔MSCs.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	康焱	中山大学附属第一医院骨科	35	154	8.0	11.0
2	雷磊	中山大学附属第一医院骨科	9	63	5.0	7.0
3	张珑涓	中山大学附属第一医院骨科	15	84	6.0	8.0
4	原向伟	中山大学附属第一医院骨科	20	34	3.0	4.0
5	廖威明	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程实验室	1	0	0.0	0.0
6	袁振华	中山大学附属第一院外科实验室	1	0	0.0	0.0