人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达

• 作者: 侯春丽 崔晓萍 应大君 朱楚洪 魏勇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人工锌指蛋白 真核表达载体 EGFP COS-7细胞
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 134-137
• 页数: 4页
• 分类号: R341|R394-33
• 字数: 4121字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.02.014

摘要

目的 构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性.方法 全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性.脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果 正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达.结论 采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达.