HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化

• 作者: 吕欣 安群星 尹文 徐志凯 杨敬 雷迎峰 韦三华
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶 大肠杆菌 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 1151-1155
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 3539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-1815.2008.05.005

摘要

在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化.根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因.合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化.成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和western-h1ot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶.获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐志凯	第四军医大学基础部微生物学教研室	216	1097	15.0	22.0
2	尹文	第四军医大学基础部微生物学教研室	264	1718	18.0	25.0
3	吕欣	第四军医大学基础部微生物学教研室	48	174	7.0	10.0
4	雷迎峰	第四军医大学基础部微生物学教研室	60	194	7.0	10.0
5	杨敬	第四军医大学基础部微生物学教研室	35	91	5.0	7.0
6	安群星	第四军医大学基础部微生物学教研室	61	151	7.0	9.0
7	韦三华	第四军医大学基础部微生物学教研室	25	111	6.0	9.0