人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白的构建和表达

• 作者: 刘芳 刘荣 姜文国 张砚君 杨纯正 杨铭 熊冬生 范冬梅
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 4-1BBL CD20 融合蛋白 免疫治疗
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 543-545,549
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 4283字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.06.001

摘要

目的:构建和表达人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性.方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150 g/L SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产物;采用FACS法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性.结果:DNA序列测定结果表明:人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白已构建成功,表达可溶性产物的产量达4 mg/L以上,具有与Raji细胞(CD20+)和A549(4-1BB+)细胞结合的活性.结论:利用融合蛋白形式,首次成功地构建了人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白,并获得较高表达.表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性.