人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建

• 作者: 刘辉 徐莉 李文鑫 赵舟宙
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 衰变加速因子 NIH3T3细胞 稳定转染 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1116-1120
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3704字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子 DAF 分子的 cDNA 编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3 细胞,建立稳定表达人 DAF 的 NIH3T3 细胞模型.方法:将人 DAF 分子的 cDNA 编码区克隆到真核表达载体 pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉淀法转染 NIH3T3 细胞,通过 G418 筛选,建立稳定转染的 NIH3T3 细胞株.用 PCR 检测人 DAF 基因在 NIH3T3 细胞基因组中的整合;用 RT-PCR、Western blot 实验和间接免疫荧光技术分别从 RNA 水平和蛋白质水平检测人补体调节蛋白分子 DAF 在细胞株中的表达.结果:成功构建了 pcDNA3-DAF 重组真核表达载体,并建立了稳定转染的 NIH3T3细胞株,成功地表达了目的基因.PCR 检测连续传代 30 次的NIH3T3 pcDNA3-DAF 细胞,结果显示人 DAF 基因仍稳定整合在异源细胞的染色体上,并未随着传代而丢失,为稳定的转染细胞株.结论:真核表达载体构建和稳定转染 NIH3T3 细胞株的建立为进一步研究人 DAF 功能和多种补体调节蛋白的协同作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文鑫	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	71	338	11.0	15.0
2	刘辉	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	62	367	12.0	15.0
3	徐莉	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	72	616	14.0	22.0
4	赵舟宙	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	5	6	1.0	2.0