鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析

• 作者: 周登春 孙涛 招丽婵 汪铭书 程安春 葛菡 袁桂萍 贾仁勇 陈孝跃
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭瘟病毒 dUTPase基因 克隆 表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1087-1093
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65+9.1|S858.325.3
• 字数: 4958字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.08.014

摘要

根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU.然后将其转化至E.coliBL21(DE3)进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66.8 ku,与预期表达蛋白大小一致.薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2%,主要以包涵体的形式存在.重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接ELISA效价为1:409 600.通过免疫荧光技术进行DPV dUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4 h的胞质中检测到特异性荧光,12 h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24 h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48 h胞核和胞质荧光均显著减弱.本研究为DPV dUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据.