结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因的克隆表达及其促生长作用的研究

• 作者: 刘家云 岳乔红 张建芳 杨柳 苏明权 郝晓柯 高晓鹏
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌,结核 细菌蛋白质类 重组融合蛋白质类 细胞因子类 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 1390-1395
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.12.023

摘要

目的 构建结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Rvl884c和Rv0867c基因的表达蛋白,并初步研究其促生长作用.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用PCR技术扩增目的 基因片段;将2个片段分别克隆入克隆载体pGEx-4T-1和pUC19,再分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1和pPRO-EXHT,经序列测定证实正确后,再经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST标记的Rv1884c融合蛋白和His标记的Rv0867c融合蛋白;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的相对分子质量大小及表达形式.结果 成功扩增出了结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因,构建了具有正确基因序列的质粒载体pGEX-4T-1-Rv1884c和pPRO-EXHT-Rv0867c,转化人大肠杆菌DH5α中经诱导产生高水平的表达产物.经SDS分析,在相对分子质量为45 000和80 000处出现新生蛋白带,凝胶薄层扫描检测表达量分别约占菌体蛋白的18.3%和23.7%.用GSTrap FF亲和层析柱和Ni2+-NTA纯化柱进行蛋白纯化,并研究这两种蛋白对藤黄微球菌、BCG和结核分枝杆菌H37Rv的促生长作用.结论 成功克隆了结核分枝杆菌Rv1884c和Rv0867c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究Rv1884c和Rv0867c基因蛋白的活性及其功能,以及研究结核分枝杆菌快速促生长作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝晓柯	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	322	1751	18.0	23.0
2	张建芳	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	146	648	14.0	18.0
3	苏明权	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	226	1052	14.0	20.0
4	刘家云	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	117	731	14.0	20.0
5	岳乔红	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	71	374	10.0	15.0
6	杨柳	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	99	517	12.0	17.0
7	高晓鹏	第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心	3	3	1.0	1.0