核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

• 作者: 张桂珍 操海萍 王大民 舒振波
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 核心蛋白聚糖 基因表达 转染 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 57-60
• 页数: 4页
• 分类号: R329.28
• 字数: 2931字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.01.015

摘要

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法:以含有人DCN cDNA的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段.真核表达载体pcDNA3及PCR产物经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pCDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定.脂质体lipofectamine介导重组载体转染CHO细胞,经G418(800 mg·L-1)筛选建立稳定转染细胞株.采用细胞免疫组织化学方法检测稳定转染CHO细胞中DCN表达.结果:PCR获得与预期大小一致约1 000 bp的特异性DNA片段;重组载体pCDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;在稳定转染的CHO细胞株中可见DCN蛋白表达.结论:成功构建DCN真核表达载体pCDNA-DEC,并建立稳定转染CHO细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张桂珍	吉林大学中日联谊医院中心实验室	109	466	11.0	16.0
2	操海萍	吉林大学中日联谊医院泌尿外科	12	54	5.0	6.0
3	舒振波	吉林大学中日联谊医院胃肠外科	41	251	9.0	13.0
4	王大民	吉林省通化市第三人民医院普外科	5	10	2.0	3.0