北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达

• 作者: 刘国华 常文环 张姝 李勇 江勇 蔡辉益 郑爱娟
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 北京油鸡 克隆 表达 293-T细胞 模型
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 71-76
• 页数: 6页
• 分类号: S831|Q785|Q786
• 字数: 3901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2008.05.016

摘要

本试验通过分子生物学手段建立了北京油鸡PEPT1细胞模型.根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,从北京油鸡肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其与pGEM-T载体连接并测定核苷酸序列,成功获得到测序正确的2 145 bp的基因,并将北京油鸡肠肽转运载体,PEPT1,基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0,构建了真核表达载体pCDL NA3-PEFT1.采用脂质体介导将表达质粒pcDNA3-PEPT1转染293-T细胞,同时转染pcDNA3.0-EGFP荧光蛋白进行转染体系荧光监测,流式细胞术检测转录后16、20、24 h的荧光强度.分别在16、20、24、44 h收集等量转染细胞,抽提转染细胞总RNA,DNAse Ⅰ处理残留的DNA污染,反转录合成cDNA,以构建不同稀释度的pGEM-T-PEPT1质粒为模板,建立SYBERGREEN实时荧光定量标准曲线,检测PEPT1在293-T细胞中的转录水平.结果表明,在质粒转染入293-T细胞后,在16、20、24、44 h均有稳定的转录水平.从而建立了在293-T细胞表达北京油鸡PEFT1的外源模型,.同时为研究该转运蛋白性质,进一步调控动物肠道肽的吸收奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡辉益	中国农业科学院饲料研究所	212	1229	19.0	26.0
2	刘国华	中国农业科学院饲料研究所	164	1225	18.0	25.0
3	张姝	中国农业科学院饲料研究所	63	517	14.0	19.0
4	郑爱娟	中国农业科学院饲料研究所	34	215	9.0	12.0
5	李勇	中国农业科学院饲料研究所	92	1649	22.0	39.0
6	常文环	中国农业科学院饲料研究所	75	501	14.0	19.0
7	江勇	中国农业科学院饲料研究所	14	55	4.0	6.0