重组大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶的pET载体的选择及乳糖诱导作用的初步研究

• 作者: 张正平 殷志敏 胥俊峰 贾晓鹤
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: γ-谷氨酰转肽酶 克隆 pET28(a) pET32(a) 乳糖 诱导表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与探讨
• 页码范围: 80-83
• 页数: 4页
• 分类号: TS201.2
• 字数: 3556字
• 语种: 中文

摘要

采用PCR技术以E.coliK-12基因组DNA为模板扩增出γ-谷氨酰转肽酶基因,克隆至原核表达载体pET28(a)和pET32(a)中,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导,由T7 lac启动子控制的重组目的产物蛋白的表达规律进行了优化研究.在对诱导条件进行优化控制的前提下,分析比较了乳糖诱导pET28(a)/]-ggt和pET32(a)/γ-ggt两种重组质粒表达大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶蛋白的可溶性及酶活.实验结果表明,对于T7lac启动子控制的重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到很好的诱导表达效果,低温培养下,乳糖诱导pET32(a)/γ-ggt重组质粒表达γ-谷氨酰转肽酶具有更高的蛋白可溶性和酶活. 杆茵BL21(DE3),借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导,由T7 lac启动子控制的重组目的产物蛋白的表达规律进行了优化研究.在对诱导条件进行优化控制的前提下,分析比较了乳糖诱导pET28(a)/]-ggt和pET32(a)/γ-ggt两种重组质粒表达大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶蛋白的可溶性及酶活.实验结果表明,对于T7lac启动子控制的重组目 产物,乳糖作为诱导剂也可以起到很好的诱导表达效果,低温培养下,乳糖诱导pET3

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	殷志敏	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	27	181	7.0	12.0
2	贾晓鹤	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	3	45	3.0	3.0
3	张正平	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	3	14	2.0	3.0
4	胥俊峰	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	3	19	3.0	3.0