TAT-Smad7-HA融合蛋白的表达及其转导活性验证

• 作者: 刘波 张恒术
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 原核表达 TAT蛋白转导结构域 瘢痕疙瘩 人Smad7蛋白 TGF-β/Smad信号通路
• 年，卷（期）: 2008,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2198-2202
• 页数: 5页
• 分类号: R341|R394-33|R619.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.23.012

摘要

目的 构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性.方法 分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA重组原核表达载体,IPTG诱导表达后经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的 片段回收和FITC标记后,将FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白作用于体外培养的人原代KFB以观察其转导活性.结果 成功构建了TAT-Smad7-HA融合蛋白的原核表达载体pTAT-Smad7-HA,目的 蛋白在诱导后获得了高效表达(占菌体总蛋白的25%以上),并成功进行了纯化(纯度达95%以上)、脱盐柱脱盐、Western blot验证、硫氧环蛋白切除及FITC标记,得到相对分子质量约为50×103的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并进一步在体外培养的人KFB细胞中证实了其高转导活性.结论 本实验获得了高纯度的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并验证了其在KFB中的高转导活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张恒术	重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室	68	276	9.0	13.0
2	刘波	重庆医科大学附属第一医院整形烧伤外科	53	205	9.0	11.0