采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体

• 作者: 刘磊 李鹏 林云锋 汤炜 王杭 田卫东 蒋红梅 龙洁
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨形态发生蛋白-2 GatewayTM技术 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 209-212
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 5208字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6273.2008.02.003

摘要

目的:采用基于attLXattR的λ噬菌体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒栽体(Ad-hBMP-2).方法:从pcDNA3.1质粒中获取目的基因hBMP-2片段,连入带attL1、attL2位点的入门载体pENTRTM11中.形成入门克隆,将入门克隆与带attR1、attR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST在高效重组酶作用下发生体外重组形成表达克隆ad-BMP-2,经鉴定将ad-BMP-2线性化后转入293A细胞包装,通过细胞裂解法获得人骨形态发生蛋白-2的基因重组腺病毒珠Ad-hBMP-2,将其扩增,采用western blotting技术分析目的蛋白表达.结果:经酶切及测序证实目的基因BMP-2片段按正确方向重组入目的载体中,带BMP-2的目的栽体在293A细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,测得病毒滴度为2.5×109pfu/ml.western blotting结果证实Ad-hBMP-2在293A细胞中高效表达hBMP-2蛋白.结论:本实验首次利用基于λ噬菌体的住点特异性重组系统的GatewayTM技术成功构建了Ad-hBMP-2,该技术与传统构建方法比较具有高效性和灵活性,为进一步研究BMP-2的生理功能和利用BMP-2进行骨基因治疗奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田卫东	四川大学华西口腔医学院	168	919	14.0	18.0
2	刘磊	四川大学华西口腔医学院	154	806	14.0	17.0
3	李鹏	四川大学华西口腔医学院	99	316	9.0	12.0
4	蒋红梅	四川大学华西口腔医学院	11	88	6.0	9.0
5	王杭	四川大学华西口腔医学院	33	144	9.0	10.0
6	汤炜	四川大学华西口腔医学院	57	378	11.0	16.0
7	林云锋	四川大学华西口腔医学院	15	109	5.0	10.0
8	龙洁	四川大学华西口腔医学院	25	176	8.0	12.0