大鼠骨骺干细胞免疫纯化和Sox9基因真核表达载体的克隆构建

• 作者: 张伟凯 祁军 郭风劲 陈安民 黄晖
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨骺干细胞 Sox9基因 质粒 表达载体 构建
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2321-2325
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.12.033

摘要

目的:Sox9基因是一种重要的早期胚胎发育相关基因,是前软骨细胞浓聚所必需的因子,其促进成骨但同时可以抑制骨骺细胞的终末分化,以延长软骨发育成熟过程,延迟软骨发育,抑制软骨细胞凋亡,有利于骨骼在生长发育阶段形成复杂的形状和结构.从骨骺干骨细胞中克隆得Sox9基因,并构建其真核表达载体.方法:实验于2007-03/07在同济医学院矫形外科实验室完成.①实验材料:出生＜24h纯系清洁级新生SD大白鼠,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:参考游洪波等方法,采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的大鼠骨骺干细胞,以FGFR-3抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定.提取骨骺干细胞总RNA,以RT-PCR方法获得Sox9基因的全长,插入pGEM(R)-T Easy Vector System克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pEGFP-IRE2构建重组复合质粒.结果:免疫组织化学证实,显微取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞.从骨骺干细胞中提取的总RNA经电泳可得28 s、18 s和5 s共3条带,测吸光度值为0.263 5,A 260/A 280为1.8741,说明提取的总RNA完整性较好,纯度高,符合RT-PCR的要求.PCR产物经电泳可得到约2000 bp的特异性条带,与预期大小一致.经限制性内切酶酶切图谱分析DNA序列测定证实的目的基因已经插入重组质粒,成功地构建了Sox9质粒.结论:成功地分离纯化了骨骺干细胞,克隆出Sox9基因并构建了Sox9基因的真核表达载体,为进一步研究Sox9的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈安民	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	315	2057	20.0	29.0
2	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	215	1233	17.0	23.0
3	祁军	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	16	96	6.0	9.0
4	黄晖	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	10	44	4.0	6.0
5	张伟凯	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	8	35	3.0	5.0