抗河豚毒素单链抗体基因的构建、表达及活性分析

• 作者: 卢士英 周玉 孟宪梅 张俊辉 张磊 李岩松 李研东 柳增善
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 工学
• 关键词: 河豚毒素 单链抗体 表达 活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-16,178
• 页数: 4页
• 分类号: TQ78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建抗河豚毒素(TTX)单链抗体表达载体并进行活性分析.方法:提取抗TFX单克隆抗体3D4杂交瘤细胞总RNA,根据鼠源单克隆抗体设计轻、重链可变区基因V1和VH引物并进行RT-PCR扩增,借助Linker(Gly4Ser)3连接成单链抗体TFX-ScFv(VH-Linker-VL)基因,克隆至表达载体pET-22b(+)后转入E.coli BL21(DE3)诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA检测表达蛋白的反应活性.结果:测序结果表明TYX-ScFv基因全长744 bp,经NCBI blast分析氨基酸序列符合鼠抗体可变区特征,其中VH366 bp,VL333 bp,Linker 45 bp,SDS-PAGE与薄层扫描分析显示表达产物相对分子量为26.045ku,表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总量的42%;ELISA检测表明TTX-ScFv可与TTX特异结合.结论:成功构建了抗TTX单链抗体表达载体,表达产物具有一定的免疫学结合活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张磊		136	431	11.0	15.0
2	柳增善		65	452	11.0	19.0
3	周玉		30	258	10.0	15.0
4	李岩松		28	215	8.0	14.0
5	张俊辉		9	9	2.0	2.0
6	卢士英		18	56	5.0	7.0
7	孟宪梅		14	34	3.0	5.0
8	李研东		10	98	5.0	9.0