多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达

• 作者: Radu Biaga 付宝权 姚菊霞 张德林 李文卉 李永光 李航 王艳华 王鸿盛 盖文燕 贾万忠
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 多头带绦虫 多头蚴 硫氧还蛋白过氧化物酶 重组蛋白 免疫原性
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 251-256
• 页数: 6页
• 分类号: S852.734|Q786
• 字数: 5400字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.03.013

摘要

从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸.对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEx-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5a后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物.结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白.对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性.