一种快速构建单靶或双靶基因位点RNAi质粒载体的方法

• 作者: 戴大鹏 蔡剑平
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 U6启动子 H1启动子 多靶点RNAi载体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 418-422
• 页数: 5页
• 分类号: R394.3
• 字数: 3071字
• 语种: 中文

摘要

目的 开发一种快速构建RNA干扰(RNAi)质粒载体的方法 .方法 以pBluescript Ⅱ质粒载体为母体,逆向导人人U6和H1启动子序列,仅用两条互补的寡核苷酸链,可快速构建单靶基因位点RNAi质粒载体;利用RNAi表达框两侧的Mun Ⅰ及EcoR Ⅰ酶切位点,将多个干扰表达框串联,可快速构建多靶基因位点RNAi质粒载体;根据以上原则,构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因和萤火虫荧光素酶(LUC)基因的单靶点及双靶点RNAi质粒载体,以检测其干扰效果.结果 构建的RNAi质粒载体可产生较理想的干扰效果,单靶点RNAi载体的干扰效率可达90%,双靶点RNAi载体的干扰效率可达87.5%.结论 该方法 可快速构建单靶点及双靶点的RNAi质粒载体,可在同一细胞内同时对多个靶基因实施有效的RNA干扰.