O型泛亚谱系口蹄疫病毒cDNA感染性克隆的建立

• 作者: 于力 周国辉 杨德成 涂亚斌 王海伟
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 全长cDNA 转录和转染 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 病原及分子生物学
• 页码范围: 1-5,15
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659
• 字数: 5259字
• 语种: 中文

摘要

本研究采用RT-PCR技术将O型口蹄疫病毒(FMDV)O/YS/CHA/05株全长基因组分4个cDNA片段进行克隆、拼接,构建了具有感染性的FMDV cDNA克隆pOKT7-OY/S/CHA/05.将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05在细胞外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞,经培养可见典型的细胞病变(CPE).同时,将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,同样也观察到典型的CPE.对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记,即在病毒核酸的3 510位人工消除了Xba Ⅰ酶切位点.免疫电镜观察和间接免疫荧光试验进一步表明,拯救出了FMDV.病毒生长比较试验表明,拯救病毒与亲本病毒具有相似的增殖特性.本研究构建了O型口蹄疫病毒的感染性克隆并获得了拯救病毒,为深入研究FMDV的致病机理以及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台.