P100蛋白及其片段重组质粒构建与表达

• 作者: 何津岩 李晓冬 杨洁 葛林 陆燕欣
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类P100蛋白 重组质粒 融合蛋白 蓝白斑筛选
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 225-228
• 页数: 4页
• 分类号: Q522.2
• 字数: 2905字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2009.03.008

摘要

目的 分别将人类p100基因,p100 的SN基因片段和TD片段定向连入pERFP-CI质粒,使它们可与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,从而为进一步研究P100蛋白及其片段的定位、功能及与其它蛋白的相互关系奠定实验基础.方法 PCR分别扩增出P100蛋白全长,SN片段和TD片段基因的序列,定向克隆至真核表达载体pERFP-CI, 构建相应的3种重组质粒.将构建成功的质粒转染入HeLa 细胞,荧光显微镜下可观察红色荧光融合蛋白表达.结果 ① PCR 法获得P100 基因序列, 长度为2 659 bp,SN基因片段1 918 bp,TD基因片段741 bp;②将重组质粒直接进行双酶切鉴定可见P100片段, 将经过蓝白斑筛选后的重组子经双酶切再与pERFP-CI载体连接并酶切得到SN片段和TD片段;③转染重组质粒后可观察到红色荧光蛋白的表达.结论 3种外源片段成功载入pERFP-CI质粒; P100全长、SN片段、TD片段均可与红色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨洁	天津医科大学免疫学教研室	56	151	7.0	10.0
2	何津岩	天津医科大学免疫学教研室	21	177	4.0	13.0
3	陆燕欣	天津医科大学免疫学教研室	2	3	1.0	1.0
4	李晓冬		2	2	1.0	1.0
5	葛林		1	1	1.0	1.0