大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

• 作者: 卢韵碧 张纬萍 方三华 林卡娜 王欣欣 蔡蓓蕾 魏尔清
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 半胱氨酸/遗传 受体 白三烯/遗传 遗传载体 GPR17 真核表达载体 HEK293细胞 细胞内钙
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 584-590
• 页数: 7页
• 分类号: Q256|Q421
• 字数: 3817字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.06.006

摘要

目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究.方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD_4处理后细胞内钙变化.结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD_4可诱导细胞内钙的增加.结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢韵碧	浙江大学医学院药理学系	27	104	5.0	9.0
2	魏尔清	浙江大学医学院药理学系	116	732	15.0	21.0
3	方三华	浙江大学医学院药理学系	13	32	4.0	5.0
4	张纬萍	浙江大学医学院药理学系	43	249	10.0	14.0
5	林卡娜	浙江大学医学院药理学系	3	7	2.0	2.0
6	蔡蓓蕾	浙江大学医学院药理学系	5	9	2.0	2.0
7	王欣欣	浙江大学医学院药理学系	2	4	2.0	2.0