OPN反义真核表达载体的构建及其对肾癌细胞增殖侵袭的影响

• 作者: 柳昊 胡伟华 解杰 郭风劲 陈安民 黄晖
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨桥蛋白基因 肾癌细胞 反义基因 基因转染
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 649-655
• 页数: 7页
• 分类号: R737.11
• 字数: 4837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2009.09.001

摘要

背景与目的:骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的过表达和多种恶性肿痛的发展和转移密切相关,然而,在肾癌中OPN所扮演的角色尚未被清楚地阐明.为验证其作为肾痛基因治疗靶点的可行性,本研究通过构建获得OPN反义基因真核表达载体转染人肾癌ACHN细胞,观察其对人肾癌细胞增殖及侵袭的影响.方法:提取ACHN细胞总RNA,RT-PCR法扩增获得OPN目的片段,将其反向克隆到pcDNA3.1(-)质粒中构建OPN反义真核表达载体,并转染人肾癌ACHN细胞.采用半定量RT-PCR法和Western印迹法检测OPN mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测对细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测对细胞周期和凋亡率的影响;软琼脂克隆形成实验和Transwell法分别检测细胞的增殖和侵袭能力.结果:RT-PCR检测OPN mRNA表达量结果显示,转染重组质粒细胞中的OPN mRNA的表达量为0.29±0.04,与转染空质粒细胞的0.86±0.05和未转染细胞的0.88±0.04相比,差异有统计学意义(P<0.05).MTT法检测结果显示ACHN/OPN细胞的生长速度受到抑制;流式细胞检测结果显示ACHN/OPN细胞生长停滞于S期且凋亡率明显升高;软琼脂克隆形成实验及Transwell实验结果显示细胞的增殖和侵袋能力下降(P<0.05).结论:OPN在肾癌ACHN细胞的增殖和侵袭过程中发挥了重要作用,反义OPN基因能抑制肾癌细胞的恶性表型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈安民	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	315	2057	20.0	29.0
2	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	215	1233	17.0	23.0
3	胡伟华	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	18	59	4.0	6.0
4	解杰	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	20	68	4.0	7.0
5	黄晖	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	10	44	4.0	6.0
6	柳昊	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	7	42	3.0	6.0