薤白EPSP合成酶基因cDNA的克隆与原核表达分析

• 作者: 周晓卉 张学文 李育强 蒋向 黄丽华
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 薤白 EPSP合成酶 cDNA克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 2297-2304
• 页数: 8页
• 分类号: S5
• 语种: 中文

摘要

[目的]揭示棉田杂草薤白(Allium macrostemon Bunge)抗草甘膦的分子机理,开发利用其草甘膦抗性特性.[方法]运用RT-PCR结合RACE技术,分离克隆了薤白中草甘膦作用的靶酶EPSP合成酶(EPSPs)基因cDNA,并将其构建成原核表达载体在大肠杆菌中诱导表达和鉴定其抗性.[结果]薤白EPSP合成酶基因cDNA序列全长1821 bp,编码一段522个氨基酸的推导蛋白质.经BLAST及蛋白质结构预测,蛋白具有EPSPs的特征序列,并与已报道的EPSPs序列有高同源性,确认克隆的cDNA序列即是薤白EPSPs基因序列,命名为EPSPsA.将该cDNA与原核表达载体pRSET-A重组后,构建成重组表达质粒pRSET-A-EPSPsA,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导了目标蛋白的高效表达.经SDS-PAGE电泳分析显示,该蛋白的分子量约为55 kD,与预期大小一致.通过草甘膦对表达细菌处理,表达菌对草甘膦的抗性显著提高.[结论]薤白EPSPs对草甘膦具有一定抗性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周晓卉	湖南农业大学生物科学技术学院	5	13	2.0	3.0
2	张学文	湖南农业大学生物科学技术学院	120	939	18.0	24.0
3	李育强		42	338	10.0	16.0
4	蒋向	湖南农业大学生物科学技术学院	6	57	6.0	6.0
5	黄丽华	湖南农业大学生物科学技术学院	43	339	9.0	17.0