构建表达猪卵透明带抗原(pZP3α)的重组乳酸杆菌

• 作者: 关艺青 潘善培 熊亚明 陈敬 黄丹
• 来源期刊: 暨南大学学报(自然科学与医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 卵透明带抗原-3α(pZP3α) 乳酸杆菌 免疫避孕 同源重组 疫苗
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 123-127
• 页数: 5页
• 分类号: R339.2
• 字数: 3528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2009.02.002

摘要

目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌.方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pllac的lac启动子下游,得到质粒pllac-pZP3α.将质粒pllac-pZP3α电穿孔转化干酪乳酸杆菌(L.casei CECT5276),挑选转化后的耐药菌落,在含5 μg/mL红霉素的MRS培养基中培养,抽提其基因组DNA做模板,PCR鉴定验证pZP3α基因是否整合到乳酸杆菌的基因组中.筛选重组菌在无红霉素选择压力下传代培养直至发生第2次重组使红霉素抗性基因消失.结果:酶切与测序结果表明信号肽和pZP3α基因正确克隆到载体pllac中;PCR鉴定证实pZP3α基因成功重组到乳酸杆菌的基因组中,培养50 d后重组乳酸杆菌抗性消失,用斑点免疫印迹化学发光法检测到经终质量分数为0.75%乳糖诱导后的上清中有pZP3α蛋白分泌.结论:成功构建表达pZP3α的重组乳酸杆菌,pZP3α在乳酸杆菌中得到了稳定的、分泌表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘善培	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	32	144	7.0	9.0
2	黄丹	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	15	80	5.0	8.0
3	熊亚明	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	2	3	1.0	1.0
4	陈敬	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	2	3	1.0	1.0
5	关艺青	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	5	15	2.0	3.0