共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价

• 作者: 丁轲 余祖华 张春杰 李旺 汪铭书 王天奇 王臣 程安春 程相朝 赵战勤 闫文朝
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅细小病毒(GPV) VP3 鹅白细胞介素-2(IL-2) 乳酸杆菌 共表达 口服免疫 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 262-269
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 6542字
• 语种: 中文

摘要

笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV) VP3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌,评价口服表达融合蛋白GPV VP3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果.通过酶切将VP3基因和IL-2基因连接,并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP,亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pMJ67,电转化入干酪乳杆菌L.CECT5276,SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组菌GPVVP3-gIL2融合蛋白的表达活性.将重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅后检测血清GPV抗体、小肠黏液sIgA和脾淋巴细胞增殖情况,评价其免疫效果.结果表明,酶切和测序结果表明成功构建重组表达载体pMJ-SP-GPVVP3-gIL2,PCR证实质粒pMJ-SP-GPVVP3 gIL2成功整合到乳酸杆菌基因组；Western blot表明重组乳酸杆菌分泌表达的融合蛋白GPVVP3-gIL2能与GPV阳性血清特异性结合;淋巴细胞增殖试验表明口服重组菌后能特异地刺激脾淋巴细胞增殖,且在第4、5、6周明显高于GPV VP3组和gIL2组；重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅可以产生抗VP3蛋白抗体,且具有中和活性的抗体显著高于GPV VP3组；小肠黏液sIgA细胞生成的数量自第2周较GPV VP3组和疫苗组显著上升.动物攻毒试验结果显示GPV VP3-gIL2融合蛋白免疫组能够获得85％的保护率,表明所构建的重组乳酸杆菌口服后对GPV的攻击具有较好的免疫保护作用.本试验成功构建能稳定表达GPV VP3-IL2融合蛋白的口服乳酸杆菌工程菌,为研究其作为口服疫苗奠定了基础.