人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定

• 作者: 方瑾 陈航
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人大肠癌 噬菌体 cDNA表达文库
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6-8
• 页数: 3页
• 分类号: R735.3
• 字数: 2900字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2009.01.002

摘要

目的:为获得大肠癌的特异性抗原基因,构建人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.方法:从2株人大肠癌细胞CCL-187和CX-1中提取总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第1链cDNA,用置换法合成第2链cDNA.双链cDNA经末端削平、EcoR Ⅰ接头连接、Xho Ⅰ酶切、过柱分级分离,除去＜400 bp片段.收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAP Express载体连接,体外包装后获得人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.结果:构建的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体文库,原始库容量为2.3×109 pfμ/L,重组率97%.重组子插入cDNA片段平均大小1 kb以上.结论:成功地构建高质量的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库,为大肠癌的特异性抗原筛选奠定了基础.