人乳腺癌细胞cDNA噬菌体表达文库构建及鉴定

• 作者: 罗荣城 蔡建中
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 细菌噬菌体 基因文库 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1788-1791
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 5140字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2007.12.005

摘要

目的:进一步分离人乳腺癌组织特异性表达基因和腺癌特异性相关基因.方法:采用SMART技术,构建人乳腺癌细胞cDNA噬菌体表达文库,从人乳腺癌细胞中分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物合成cDNA第一链,利用SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA 5'端延伸出去的模板,采用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经酶切和过柱分级分离后,克隆入λTriplEx2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果:原始人乳腺癌细胞cDNA噬菌体表达文库获得1.68×107个重组子,重组率达到98%.文库扩增后,滴度达到4.2×109 pfu/mL,插入cDNA平均长度为2 800 bp.结论:构建的人乳腺癌细胞cDNA噬菌体表达文库具有良好的质量,该cDNA文库为进一步筛选乳腺癌抑癌基因及乳腺癌特异性表达基因奠定了基础.