Galectin-1 RNAi载体构建及其稳定转染LST-R1细胞系的建立

• 作者: 姜泊 张亚历 童华生 苏磊
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结直肠肿瘤 半乳糖结合蛋白 RNA干扰 细胞系,转化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 307-310
• 页数: 4页
• 分类号: R735.34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.03.021

摘要

目的 构建galectin-1基因特异小分子干扰RNA(siRNAs)真核干扰载体,并获得干扰载体稳定转染的LST-R1细胞系.方法 设计2对galectin-1 mRNA(GenBank:NM002305)特异性siRNAs,两端分别带有BamH I/Hind Ⅲ酶切位点和一个9nt的发夹结构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pSUPgR-puro中,构建galectirt-1 siRNA表达载体,以EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切及测序验证重组载体的正确性.将重组载体与pcDNA6/TR共转染LST-R1细胞,以嘌呤霉素(0.8μg/ml)进行阳性克隆筛选.四环素(4μg/ml)诱导48h后,RT-PCR检测galectin-1 mRNA表达水平,Western blotting和细胞免疫化学方法检测galectin-1蛋白质水平的变化.结果 测序表明galectin-1 siRNA真核表达载体p-shRNA1和p-shRNA2干扰序列与读码框相符.p-shNRA1和p-shRNA2与pcDNA6/TR共转染LST-R1细胞,获得稳定的重组质粒转染细胞p-shRNA1-LST和p-shRNA2-LST.RT-PCR显示,galectin-1 mR-NA在LST-R1细胞、p-shRNA1-LST细胞、p-shRNA2-LST细胞以及p-LST细胞中的表达量分别为0.616、0.298、0.373和0.641,以p-shRNA1-LST的干扰效果最好.Western blotting结果显示,在LST-R1、p-shRNA1-LST、p-shRNA2-LST和p-LST细胞中galectin-1的表达量分别为1.00、0.07、0.38和0.97,以p-shRNA1-LST干扰效果最好,与免疫细胞化学的结果一致.结论 成功构建了galectin-1真核干扰载体,RNAi载体转染LST-R1细胞系的建立为进一步研究galectin-1在大肠侧向扩散型肿瘤中的作用奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜泊	南方医科大学南方医院消化病研究所	161	1166	17.0	25.0
2	张亚历	南方医科大学南方医院消化病研究所	121	704	15.0	21.0