睾丸特异性新基因T490真核荧光表达载体的构建及其表达

• 作者: 周永翠 唐爱发 桂耀庭 江智茂 蔡志明 郑锦芬
• 来源期刊: 中国男科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 睾丸 精子发生 绿色荧光蛋白质类
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-9
• 页数: 4页
• 分类号: R34|R339.21
• 字数: 2672字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0848.2009.01.003

摘要

目的 构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的睾丸特异性新基因T490超表达质粒pDT490-EGFP,检测其在Hela细胞中的表达情况.方法 采用RT-PCR的方法从成年Balb/c小鼠睾丸组织中扩增T490基冈,将该基凶连接克降到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,再将T490和EGFP融合基因酶切下来,克隆到pcDNA3.1(-)真核超表达载体上,以构建重组质粒pDT490EGFP.将该重组质粒通过阳性脂质体Lipofectamine 2000导入Hela细胞系中,在荧光显微镜F观察转染24h后融合基因的超表达情况,并用RT-PCR的方法进一步证实目的 基因mRNA的表达水平.结果 RT-PCR获取编码T490基因的全序列cDNA,大小为508bp;DNA测序和PCR方法证实T490和EGFP融合基因成功克隆到真核超表达载体L;在荧光显微镜下,转染24h后的Hela细胞具有很强的绿色荧光;RT.PCR显示转染后的Hela细胞T490基因mRNA的表达明显.结论 重组质粒pDT490-EGFP构建成功,并在细胞内明显表达,此质粒可应用于研究睾丸特异性新基因T490的功能,为T490的生物学研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	桂耀庭	北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室	78	236	9.0	11.0
2	蔡志明	北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室	123	812	15.0	21.0
3	唐爱发	北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室	23	88	5.0	8.0
4	江智茂	北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室	21	44	3.0	5.0
5	郑锦芬	北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室	13	31	3.0	5.0
6	周永翠	北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室	2	7	1.0	2.0