重组人载脂蛋白A5原核表达载体的构建及分析鉴定

• 作者: 倪军 张葵 李雷 邱方 顾光煜 魏红霞
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 载脂蛋白A5 表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 53-56
• 页数: 4页
• 分类号: Q789
• 语种: 中文

摘要

目的 构建重组人载脂蛋白A5(apoA5)原核表达载体,为进一步制备抗apoA5的单/多克隆抗体奠定基础.方法 从人肝癌组织中抽提总RNA,以此为模板,逆转录降度PCR扩增载脂蛋白A5编码区基因全长,构建含有目的 片段的克隆载体pPCR-Script ampSK(+)-apoA5及原核表达载体pET16B-apoA5,通过酶切、测序及诱导表达等验证重组质粒的准确性.结果 PCR扩增出1.1 kb特异性片段,克隆至pPCR-Script ampSK(+)后测序,结果表明序列同源性与gene bank报道一致,重组质粒pET16B-apoA5经双酶切后电泳显示约为5.7 kb和1.1 kb的片段,酶切图谱与预期一致,诱导表达蛋白的大小与预期一致.结论 成功构建了重组人载脂蛋白A5的原核表达载体.