人载脂蛋白C Ⅱ原核表达载体构建及蛋白表达方法

• 作者: 刘新宇 毛用敏 汪军梅 解用虹 赵莉莉 赵郁
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 载脂蛋白CⅡ 脂蛋白脂肪酶 基因工程 高甘油三酯血症 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 29-31
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 3442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2014.01.010

摘要

目的 构建人载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)的原核表达载体,表达融合蛋白GST-hApoCⅡ.方法 采用限制性内切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pUC18/hApoCⅡ获得ApoCⅡ成熟肽基因片段,并与相同酶切处理的表达载体pGEX-3X连接构建重组质粒.重组质粒经酶切鉴定、测序验证后转化感受态E.coli DH5α,IPTG诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳分析鉴定.选取最佳条件诱导表达,亲和层系法纯化融合蛋白,采用Western blot鉴定.结果 重组质粒经酶切和测序后证实目的基因已连接入表达载体,SDS-PAGE检测到35 kD的目的蛋白条带,优化和纯化后经Western blot证实蛋白质产物为融合蛋白GST-hApoCⅡ.结论 本方法成功表达融合蛋白GST-hApoCⅡ,此为ApoCⅡ结构及其作用机理研究及制备ApoCⅡ抗体等提供了便利条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵郁	天津医科大学生物化学教研室	17	85	5.0	8.0
2	刘新宇		22	103	5.0	9.0
3	解用虹	天津医科大学生物化学教研室	28	133	6.0	10.0
4	汪军梅		2	0	0.0	0.0