弹性蛋白酶基因(PAE)的克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 林希谨 田洪涛 罗云波 许文涛 谷新晰 陈卓君 黄昆仑
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 弹性蛋白酶 基因克隆 载体构建 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1114-1118
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3979字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.06.027

摘要

以1株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,经PCR扩增得到的铜绿假单胞菌弹性蛋白酶(P.acruginosa elastase,PAE)基因,与GenBank中的序列对比发现同源性为99%.成功地构建了重组表达载体pPIC3.5K/PAE,莺组质粒Sac Ⅰ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株KM71中,通过PCR和表型鉴定表明,PAE基因已经整合到毕赤酵母染色体上.经大量筛选获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子.在甲醇诱导下,经过毕赤酵母高密度发酵进行PAE的表达,经SDS-PAGE分析.结果表明,在培养基上清中含有一明显特异性蛋白条带,大小为34kD.活性检测结果,酶活为1 060 U/mL,是出发菌株的26倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗云波	中国农业大学食品科学与营养工程学院	257	3241	29.0	44.0
2	田洪涛	河北农业大学食品科技学院	102	1161	19.0	29.0
4	黄昆仑	中国农业大学食品科学与营养工程学院	85	903	16.0	26.0
5	谷新晰	河北农业大学食品科技学院	42	131	8.0	9.0
6	许文涛	中国农业大学食品科学与营养工程学院	109	782	15.0	23.0
7	陈卓君	中国农业大学食品科学与营养工程学院	5	66	4.0	5.0
8	林希谨	中国农业大学食品科学与营养工程学院	3	14	2.0	3.0