检测T-bet表达活性的荧光素酶报告基因质粒的构建和鉴定

• 作者: 石太平 郭帅 马大龙 高鹏
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 报告基因 T-bet 电泳迁移率检测
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 650-655
• 页数: 6页
• 分类号: R4
• 字数: 5116字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.07.018

摘要

目的 构建一个能应用于T-bet转录活性研究和大规模筛选的报告基因质粒.方法 以IFN-γ基因的CNS-22 T box结合位点序列为基础,人工合成顺式元件DNA(TbRE),重组连接到报告基因载体pLUC-MCS中.经测序验证后,转染293T细胞检测报告基因对T-bet的响应,并通过电泳迁移率检测(EMSA)证实T-bet与TbRE元件的特异结合.结果 成功构建了TbRE-LUC报告基因质粒.经荧光素酶活性检测证实外源表达的T-bet对报告基因的表达可以有20倍左右的激活,并且存在剂量效应,T-bet的表达量与报告基因的表达水平呈正相关.经电泳迁移率检测验证,T-bet可以与TbRE顺式反应元件特异性结合.结论 成功构建了T-bet转录活性相关的报告基因质粒TbRE-Luc,该报告基因系统反应灵敏,特异性强,可用于大规模筛选T-bet转录调控相关基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭帅	北京大学医学部基础医学院医学免疫学实验室	7	2	1.0	1.0