Neurocan基因蛋白表达及其抗体制备与检测的实验研究

• 作者: 吕俊 姜晓丹 徐如祥 杜谋选 陈镇洲
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Neurocan基因 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 109-113
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2009.02.001

摘要

目的 制备Neurocan蛋白,用此蛋白免疫动物制备抗血清,并对抗血清进行检测,最终使待参与DNA疫苗构成的Neurocan蛋白所产生的抗体能与脑内创伤Ⅸ的相应抑制性蛋白抗原结合,从而减轻抑制因子对神经生长的抑制作用,促进神经再生. 方法 合成]Weuroc011,基因,构建原核表达质粒PET30a-Neurocan,转化大肠杆菌BL21.异丙基-β-D.硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的 蛋白,并经SDS-PAGE、Western blot鉴定.Neurocan蛋白免疫兔制备免疫血清.ELISA法检测抗血清效价,以兔免疫前血清为阴性对照;Western blot检测抗血清特异性,以免疫血清为一抗,山羊抗兔-AP为二抗,NBT/BCIP显色. 结果 合成的Neurocan基因经酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定,显示序列正确.原核表达Neurocan蛋白经过SDS-PAGE鉴定,条带大小约为55 000,与计算出来的大小一致;经Western blot鉴定.目的 蛋白能与his抗体特异性结合,说明是Neurocan,基因的表达产物.抗血清经ELISA法检测.抗血清效价达到1:100万;经Western blot检测.目的 条带明显. 结论 Neurocan蛋白原核表达成功;通过Neurocan蛋白免疫兔可得到特异性抗体,此抗体能与Neurocan蛋白特异性结合,为DNA疫苗的进一步研制奠定了基础.