人溶菌酶N端与Exendin-4嵌合蛋白的基因克隆及原核表达

• 作者: 刘宇婷 刘誉 周羽竝 曾可静 朱元昌 潘霞明 王明
• 来源期刊: 暨南大学学报(自然科学与医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: Exendin-4 人溶菌酶 嵌合多肽 原核表达 糖尿病
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 595-600
• 页数: 6页
• 分类号: R587.1|Q78
• 字数: 5161字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2009.06.004

摘要

目的:克隆嵌合多肽人溶菌酶N端-Exendin-4基因并进行原核表达和纯化.方法:通过重组PCR技术将人溶菌酶N端74个氨基酸的基因序列与Exendin-4多肽基因序列相连接,其间引入一段由凝血酶和二肽基肽酶识别位点组成的连接序列.以嵌合基因hLYZ(N74)-Ex4与质粒pET-32a(+)构建原核表达体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达.表达蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化、Western blotting鉴定;透析复性后,以肠激酶切割并回收目的多肽.结果:重组质粒pET-32a/hLYZ(N74)-Ex4构建正确,目的蛋白主要以包涵体形式存在,37℃诱导4h、IPTG浓度为0.6 mmol/L时表达量最高,约占菌体蛋白总量的30%.Western blotting检测显示重组蛋白为单一清晰条带.重组蛋白经肠激酶切割后,回收得到高纯度的嵌合多肽.结论:成功构建hLYZ(N74)-Ex4嵌合基因的原核表达质粒,高效原核表达并获得高纯度目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周羽竝	暨南大学医学院生物化学教研室	45	195	7.0	11.0
2	刘誉	暨南大学医学院生物化学教研室	28	104	6.0	9.0
3	朱元昌	暨南大学医学院生物化学教研室	2	4	1.0	2.0
4	王明	暨南大学医学院生物化学教研室	2	6	2.0	2.0
5	潘霞明	暨南大学医学院临床医学系	2	8	2.0	2.0
6	刘宇婷	暨南大学医学院临床医学系	1	4	1.0	1.0
7	曾可静	暨南大学医学院临床医学系	1	4	1.0	1.0