小鼠CYP2E1基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张伟 张连峰 李小颖
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CYP2E1 微小RNA RNA干扰
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 9-12,插6
• 页数: 5页
• 分类号: R349
• 字数: 3038字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2009.06.002

摘要

目的 设计并构建靶向小鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒,为探索CYP2E1基因功能奠定基础.方法 应用invitrogen设计软件设计两条干扰小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA序列,合成相应的回文DNA序列,退火后分别连接到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体上,构建两套miRNA真核表达载体CYP2E1-miR1和CYP2E1-miR2,并使用该载体特有的串联方法将两载体上的miRNA前体寡核苷酸序列进行串联成为CYP2E1-miR1-miR2;将上述重组载体分别与构建的pcDNA3.1(+)-CYP2E1表达质粒共转染入293T细胞,RT-PCR法鉴定其干扰效果.结果 经酶切及测序鉴定,针对鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够有效抑制共转染入293T细胞的pcDNA3.1(+)-CYP2E1质粒的表达,且串联质粒CYP2E1-miR1-miR2优于单独的干扰质粒CYP2E1-miR1及CYP2E1-miR2.结论 小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA表达载体构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张伟		2	47	1.0	2.0
2	张连峰		13	105	6.0	10.0
3	李小颖		3	13	2.0	3.0