高羊茅叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测

• 作者: 于荣 吴忠义 张秀海 王永勤 赵彤 黄丛林
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 高羊茅 叶绿体表达载体 定点整合 重叠延伸PCR法 瞬时表达 GFP荧光
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1116-1122
• 页数: 7页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.03.046

摘要

[目的]验证高羊茅叶绿体表达载体在高羊茅叶绿体中的瞬时表达情况,为今后在高羊茅叶绿体中稳定表达该载体,获得耐早高羊茅的叶绿体转基因株系奠定基础.[方法]首先从高羊茅草叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段.然后将耐旱相关基因酵母海藻糖合酶基因tps1与水稻叶绿体16S rRNA基因的强启动子Prrn,烟草叶绿体基因psbA的终止子构建表达盒(Prrn-tps1-TpsbA-ter),连同草丁膦抗性基因bar表达盒、卡那霉素抗性基因nptII和绿色荧光蛋白基因gfp构建的融和基因表达盒一起克隆到定点整合同源片段之间,构建高羊茅叶绿体的稳定表达载体gTKGB.通过基因枪轰击法将gTKGB转化到高羊茅幼嫩叶片中,用激光共聚焦扫描显微镜对GFP的表达情况进行检测分析.[结果]克隆的高羊茅叶绿体基因16S-trnI-trnA-23S在NCBI登录号为:0Q490947-DQ490950.构建的叶绿体表达载体gTKGB转化高羊茅幼嫩叶片,在叶绿体中有很好的GFP表达.[结论]高羊茅叶绿体表达载体gTKGB可用于高羊茅叶绿体转化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王永勤	北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心	34	337	10.0	16.0
2	张秀海	北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心	48	499	12.0	20.0
3	吴忠义	北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心	50	483	12.0	19.0
4	黄丛林	北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心	57	710	15.0	24.0
5	于荣	首都师范大学生命科学学院	21	118	6.0	10.0
6	赵彤	北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心	2	9	2.0	2.0