显性负突变存活素质粒的构建

• 作者: 张宇玲 朱依纯 王铭洁 琚立华 蔡文杰
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 显性负突变 存活素 重叠PCR
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 188-192
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 2632字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建显性负突变存活素质粒.方法 从大鼠心脏微血管内皮细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,利用巢式PCR扩增存活索基因全序列,并引入酶切位点,利用重叠PCR对存活素基因进行定点突变,然后与带绿色荧光的真核表达载体pEGFP-N3进行重组,经测序鉴定后转染细胞,观察对细胞凋亡的影响.结果 用巢式PCR扩增出含存活素基因的496 bp产物,和引入酶切位点后452 bp产物.通过重叠PCR 3次PCR反应,得到452 bp大小的定点突变产物.重组载体经测序鉴定表明插入片段无误,转染细胞后能发出明亮的绿色荧光,Hochest染色显示细胞凋亡比空质粒对照组显著.结论 成功构建了显性负突变存活素质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡文杰	上海理工大学医疗器械与食品学院基础医学教研室	24	86	5.0	8.0
2	王铭洁	复旦大学上海医学院生理与病理生理学系	11	43	4.0	6.0
3	张宇玲	上海理工大学医疗器械与食品学院基础医学教研室	15	50	4.0	6.0
4	琚立华	上海理工大学医疗器械与食品学院基础医学教研室	7	42	4.0	6.0
5	朱依纯	复旦大学上海医学院生理与病理生理学系	38	169	8.0	11.0