重组人纤溶酶原基因的酵母表达、产物纯化及鉴定

• 作者: 宋后燕 宋钢 张艳玲 莫炜 陈武
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴斯德毕赤酵母 丝氨酸蛋白酶区 纤溶酶原 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文

摘要

目的:研究重组人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶结构域(rhPLG-SP)的酵母表达、纯化及理化性质.方法:采用7.5 L发酵罐对巴斯德毕赤酵母(Pichic pastoris)工程菌rbPLG-SP/GS115进行高密度培养、甲醇诱导表达rhPLG-SP,培养液经三步纯化:超滤、Sephacryl S-100、SP-Sepharose FF,将活性组分透析后冷冻干燥.等点聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测rhPLG-SP等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物S-2403分别测定rhPLG-SP激活后的纤维蛋白溶解和酰胺水解活性.结果:7.5 L高密度发酵可获得约为400mg/L培液的表达量,经三步纯化后制备的rhPLG-SP纯度大于96%.理化分析显示rhPLG-SP的等电点为7.5～7.8,分子量:27 877 Da,比活性:23.6U/mg.结论:初步建立了rhPLG-SP酵母工程菌的高密度培养、表达及纯化工艺,所制备半成品活性与血浆提取的PLG相近,具备放大生产和应用的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋后燕	复旦大学分子医学教育部重点实验室	94	467	12.0	17.0
2	莫炜	复旦大学分子医学教育部重点实验室	22	92	6.0	9.0
3	陈武	广东药学院生命科学与生物制药学院	5	15	2.0	3.0
4	张艳玲	复旦大学分子医学教育部重点实验室	3	29	2.0	3.0
5	宋钢	复旦大学分子医学教育部重点实验室	2	6	2.0	2.0