人生长激素释放激素变异受体1型基因绿色荧光蛋白真核表达载体1的构建及体外表达

• 作者: 张蕾 李伟伟 李鹏飞 田力
• 来源期刊: 江西医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 生长激素释放激素变异受体1型 鼠成纤维细胞株NIH-3T3 转染 绿色荧光蛋白真核表达载体1
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 4445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2294.2009.03.004

摘要

目的 构建人生长激素释放激素变异受体1型(GHRHR-SVT1)基因绿色荧光蛋白真核表达载体1(pEGFP-N1)并在鼠成纤维细胞株NIH-3T3细胞中的表达.方法 GHRHR-SVT1基因是由人胃癌细胞株AGS中扩增出的DNA片段,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,用高效转染试剂将pEGFP-N1/GHRHR-SVT1转染NIH-3T3细胞,NIH-3T3细胞分3组:非转染组(对照组),只加转染试剂不加质粒;转染空质粒组(pEGFP-N1组),加转染试剂与空质粒;重组质粒转染组(pEGFP-N1/GHRHR-SVT1组),加转染试剂与重组质粒.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测各组转染后各组NIH-3T3细胞的生长情况.结果 (1)pGEFP-N1/GHRHR-SVT1经限制性内切酶XhoⅠ和Bam H Ⅰ双酶切产生约1 080 bp和4 700 bp 2条带.(2)构建的GHRHR-SVT1 cDNA 序列与GHRHR-SVT1原始序列(AF-282259) 进行对比,第54位碱基突变(A突变为T),为无义突变.(3)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖率明显高于对照组(P<0.01).(4)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖指数明显高于对照组(P<0.01).结论 在适当浓度GHRH(10 μmol/L)的培养基中,GHRHR-SVT1能够促进NIH-3T3细胞增殖, 并为肿瘤的治疗提供新的思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张蕾	辽宁医学院生化教研室	25	53	4.0	5.0
2	李伟伟	辽宁医学院生化教研室	14	25	3.0	4.0
3	田力	辽宁医学院生化教研室	7	6	1.0	1.0
4	李鹏飞	辽宁医学院生化教研室	10	27	2.0	4.0