食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究

• 作者: 于师宇 任洪林 卢士英 孟宪梅 宫彬彬 李兆辉 柳增善 王克坚
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 食源性致病菌 基因串联 融合毒素 血清抗体 ELISA检测
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 1122-1126
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建4种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体. [方法]采用柔性Linker序列(G-G-G-G-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1B-SEA-VT2B-BoNTaHc-SEB),构建重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性. [结果]成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中成功表达,37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量10.2%),基因序列全长3 384bp,编码1 127个氨基酸,蛋白分子量为127 205,测序结果与设计序列一致性为100%.ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素F6与4种食源性致病菌有良好的反应原性,与多种非目标菌不反应. [结论]成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清,为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌,进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础.