猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建

• 作者: 吕晓丽 崔保安 方剑玉 王东方 王彦彬 郭小参 陈红英
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪白细胞介素-2 克隆 序列分析 杆状病毒
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 129-133
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 3696字
• 语种: 中文

摘要

参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序.测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%.与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%.将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2.本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础.