猪细小病毒NS1蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 冉旭华 周恩民 孟凡 闻晓波
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 NS1蛋白 主要抗原表位区 表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 964-967,985
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3773字
• 语种: 中文

摘要

通过分子生物学软件对GenBank中发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)中国株NS1蛋白的氨基酸序列进行分析,确定了主要抗原表位区域,针对此区域设计了1对特异性引物.通过PCR方法扩增出长度为843bp的基因片段,将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,构建了原核表达我体pET30a-NS1,实现了PPVNS1蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效表达.重组蛋白相对分子质量约为43 000,与预期相符.Western-blot试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性.以纯化的该蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为2 mg/L,一抗的最佳稀释倍数为1:100,阳性标准为:待检血清D150≥0.36,且待检血清D450/阴性血清D4502,作为阴阳性临界值,初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法.用该方法对临床血清样本进行检测,间接ELISA判定为阳性的60份血清,经Western-blot试验只有45份为阳性.随机抽取100份猪血清样品与商品化试剂盒检测结果对比,符合率为96%,表明所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,为流行病学调查和疾病的鉴别诊断奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冉旭华	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	52	175	7.0	10.0
2	闻晓波	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	59	191	7.0	11.0
3	孟凡	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	4	16	2.0	4.0
4	周恩民	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	6	28	3.0	5.0