restin及其位点缺失体的表达载体构建、表达及分析

• 作者: 押挥远 王颖 耿惠敏
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: restin NLS/CKII位点 真核表达载体 核定位
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 673-676
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 3663字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-6611.2009.08.001

摘要

目的 构建人restin及其核定位信号序列(nuclear localization signal,NLS)、酪蛋白激酶Ⅱ(casein kinase Ⅱ,CKⅡ)作用位点缺失体基因rt1、rt2的真核表达载体并检测其在非洲绿猴肾细胞COS-7中的表达.方法 应用RT-PCR方法从体外培养的人胚肾细胞HEK293的mRNA中扩增出restin及其缺失体基因的编码区,克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)3×flag,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染COS-7细胞,Western blot检测restin、rt1、rt2的表达及其亚细胞定位情况,从而确定功能位点缺失是否影响了Restin的核定位.结果 测序证实PCR扩增得到的restin、rt1、rt2基因编码区序列正确;脂质体法转染COS-7细胞后检测到预期目的 蛋白的表达.截取NLS/CKII位点阻滞了Restin的细胞核定位.结论 成功构建了restin及其缺失体基因的真核表达载体并使其在COS-7细胞中表达并检测到功能结构域的缺失引起蛋白Restin的核定位变化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	耿惠敏	洛阳师范学院生命科学系	16	69	5.0	7.0
2	王颖	洛阳师范学院生命科学系	10	79	4.0	8.0
3	押挥远	洛阳师范学院生命科学系	2	1	1.0	1.0