小鼠抵抗素基因及其反义核酸真核表达体系的构建与鉴定

• 来源期刊: 临床医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: 抵抗素 基因 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 53-55
• 页数: 3页
• 分类号: R58
• 字数: 3122字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,为下一步进行resistin生物功能研究打基础.方法 用resistin基因mRNA编码区序列特异引物,从小鼠脂肪组织中,通过RT-PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA连接酶将resistin cDNA克隆于pGEM-T栽体,经双酶切及测序鉴定克隆成功后再亚克隆于pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)真核表达栽体,并测序鉴定.结果 PCR产物长度与resistin cDNA理论长度363 bp相符:重组pGEM-T被EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ内切酶切为约3000 bp和355 bp两个片段,测序结果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列与小鼠resisdn基因mRNA编码区序列完全一致.重组pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)测序结果表明插入的DNA片段分别与小鼠resistin基因mRNA编码区序列和反义resistin基因mRNA编码区核苷酸序列一致.结论 成功克隆载有resistin基因和载有resistin基因反义核酸的重组真核表达质粒.