基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体

• 作者: 张婷 李宏杰 李常颖 畅继武
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 Fab TNF-α 制备 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2081-2084
• 页数: 4页
• 分类号: R730.51
• 语种: 中文

摘要

目的 利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性.方法 用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性.结果 成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体.ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应.结论 成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径.为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	畅继武	天津医科大学第二医院泌尿外科研究所	59	139	6.0	8.0
2	李常颖	天津医科大学第二医院泌尿外科研究所	19	27	3.0	4.0
3	张婷	天津医科大学第二医院泌尿外科研究所	8	3	1.0	1.0