ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化

• 作者: 何贤辉 张延亭 徐丽慧 欧阳东云 耿梅 陈清
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 中性氨基酸转运蛋白2 胞外结构域 可溶性表达 合胞素
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-130
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3815字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.02.007

摘要

目的 构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体,优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件,并获得纯化的ECL2蛋白.方法 以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段,插入至pET-41b载体中,构建ECL2的原核表达载体,转化至大肠埃希菌,优化可溶性表达条件,GSH-Agarose亲和层析纯化并鉴定,与MCF-7细胞结合活性的测定.结果 免疫印迹显示,ECL2融合蛋白既表达于包涵体中,也能以可溶性形式表达.随IPTG浓度的增高,可溶性表达水平提高;培养温度为28 ℃和33 ℃时可溶性产物高于37 ℃;而随诱导时间的延长至12 h以上,可溶性表达量下降.可溶性表达优化条件为:温度33 ℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间4 h.经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性.结论 优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件,通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐丽慧	暨南大学生物工程研究所	69	509	13.0	20.0
2	欧阳东云	暨南大学组织移植与免疫实验中心	21	109	5.0	10.0
6	陈清	暨南大学组织移植与免疫实验中心	2	0	0.0	0.0
10	耿梅	暨南大学组织移植与免疫实验中心	1	0	0.0	0.0
11	张延亭	暨南大学组织移植与免疫实验中心	6	26	2.0	5.0