重组人ASCT2胞外结构域ECL2在大肠杆菌中的表达及其鉴定

• 作者: 何贤辉 徐丽慧 欧阳东云 郭贺 陈清 高琦
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 合胞素 中性氨基酸转运蛋白 胞外结构域 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 213-218
• 分类号: Q786
• 字数: 5462字
• 语种: 中文

摘要

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域.通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列,与pET-41b连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌中获得高效表达,重组蛋白在N-和C-端分别融合谷胱甘肽转移酶(GST)和His6标签,融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白,该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面,具有结合合胞素的潜在活性,这些结果为进一步研究ASCT2与合胞素的相互作用奠定了基础.