人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达

• 作者: 冯若飞 张海霞 李倩 李向茸 李生军 王兴陇 马瑞仙
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 跨膜蛋白39A 条件优化 融合蛋白 可溶性表达
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 932-936
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3301字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A.方法 以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性.结果 重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9％,氨基酸序列同源性为100％.重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A600nm值为0.6～0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达.结论 成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据.